真核有参转录组测序

服务介绍：

转录组测序（mRNA-seq）：基于二代测序平台，对某一物种或特定细胞在某一功能状态下产生的mRNA进行高通量测序，经定量和差异分析，获得不同比较组合下差异表达的基因，再基于GO和KEGG等数据库对差异表达基因进行功能注释和富集分析。

转录组送样登记单.xlxs

分析内容：

实验结果展示：

1、差异基因火山图

2、差异表达基因聚类热图   

3、差异表达基因KEGG分析

实验流程：

样本处理-TotalRNA抽提与质检-文库构建-PE150测序-数据分析；

送样运输要求：

以下所有样本必须在送样管上标记清楚样本编号，-80℃冰箱冻存（-80℃冻存时间不超过一个月，避免反复冻融导致RNA降解），全程干冰运输送样。组织样本建议用组织RNA稳定保存液进行保存。

一、动物组织样本

1、动物处死后5min内取样，全程冰上操作，先取易降解的组织，如胰腺、肠、胃等，再取其它组织，组织块至少取50mg以上（黄豆大小）。组织取好后用预冷的PBS轻轻漂洗掉样本表面的血污，例如心、肝、脾、肾等血污较多的组织，可用预冷PBS清洗多次，直至血污清洗干净，用滤纸吸干组织表面液体，立即放入EP管或冻存管中液氮速冻5min后，转移到-80℃冰箱保存；或迅速完全浸泡于5～10倍体积的RNAsolidTM组织RNA稳定保存液中，4℃渗透过夜，转移到-80℃冰箱保存；干冰送样。

2、肠，胃，血管，食管，子宫等标本，取材后立即把组织切开用预冷PBS清洗多次，去除内容物，用滤纸吸干组织表面液体，立即放入EP管或冻存管中液氮速冻5min后，转移到-80℃冰箱保存；或迅速完全浸泡于5～10倍体积的RNAsolidTM组织RNA稳定保存液中，室温渗透半小时后，转移到-80℃冰箱保存；干冰送样。

3、脊髓，主动脉，气管，神经等标本长度不得少于1cm。

4、视网膜需单独剥离，小鼠至少需要4个视网膜合并，大鼠至少需要2个视网膜合并。

5、卵巢需单独剥离，去除周围脂肪，小鼠至少需要2个卵巢合并。

6、皮肤样本需去净毛发。

如有特殊特定部位取材，必须提前分离好送样，实验室不进行指定部位取材操作。

二、细胞样本（细胞量至少106）

1、悬浮细胞：

培养结束后，离心去除培养液：收集的细胞用PBS缓冲液快速冲洗2次，低速离心除去PBS缓冲液；在操作过程中应轻柔，防止细胞破碎，低速离心除去PBS缓冲液：每1~5×10⁶个细胞加入1mL RNA提取液（G3013)(用1ml吸头反复吹打细胞至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮不粘稠的状态)，使样品管在室温放置10min，放入干冰或-80℃冰箱中保存，干冰送样。

2、贴壁细胞：

培养结束后，吸取去除培养液，用PBS缓冲液快速冲洗2次（贴壁牢固可以先用胰酶消化后再继续下述操作）；按每10cm²培养面积(相当于六孔板一个孔或35mm直径培养血)加入1mL RNA提取液（G3013)的比例，用1mL吸头反复吹打至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮不粘稠的状态，使RNA提取液接触所有长有细胞的培养皿表面，并进行充分消化。转移到RNase-free的1.5mL或2mL离心管中，放入干冰或-80℃冰箱中保存，干冰送样。

三、全血样本

EDTA 抗凝管采集新鲜血液 0.7mL，直接加入 3 倍体积的 RNA提取液（G3013)，充分震荡混匀后，室温孵育5min，-80℃冰箱保存，干冰送样。

三、提取好的RNA干冰运输，不要再加入保存液或提取液。RNA质量2ug以上，体积20ul以上，OD260/OD280在1.8到2.0之间。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！