iTRAQ标记定量蛋白质组学

服务介绍：

　　以定量蛋白质组学（Quantitative Proteomics）方法进行差异蛋白质组学分析是发现的第一步。它通过个体/细胞/复杂体系中的全部蛋白质进行精确鉴定和定量来获得不同样本和处理间蛋白表达的差异信息。可用于筛选通过刺激、治疗、诱导等诸多因素引起的样本之间的差异表达蛋白，结合生物信息学揭示细胞生理病理功能，同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。

　　iTRAQ技术是美国应用生物系统(AB SCIEX)公司与2004年推出的一种全新的体外同重同位素标记的相对与绝对蛋白组定量技术。该同位素标记法利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端和赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量，能够高通量地寻找不同蛋白质组的差异蛋白并且准确进行相对或绝对定量，是近年来定量蛋白质组学中应用广泛的高通量筛选技术。

　　iTRAQ定量标记蛋白质组学流程图：

　　实验流程：

　　蛋白提取—蛋白酶解—肽段标记富集—高分辨质谱检测采集数据—数据库检索—数据整理分析

　　送样运输要求：

　　1、蛋白样本

　　①蛋白量大于100ug，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②建议测定蛋白浓度后，液氮速冻，避免蛋白降解，另外需要告知蛋白溶液的缓冲液成分和浓度，方便实验室收到后进行后续处理。

　　③胶条、胶点样本不建议进行定量蛋白质组学。

　　2、细胞样本

　　①细胞量1x10⁷个，收集细胞沉淀，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液清洗三次，去除培养基成分，然后离心去除上清保存。

　　3、血清样本

　　①样本量500uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样本应尽量避免溶血。

　　4、血浆样本

　　①样本量500uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样本应尽量避免溶血。

　　5、尿液样本

　　①样本量2mL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样品应尽量避免带入粪便残渣。

　　6、动物组织样本

　　①样本量300mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液冲洗表面血液，并用滤纸吸干多余水分，避免冻存时结冰。

　　③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

　　7、植物组织样本

　　①样本量500mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液冲洗表面泥沙，并用滤纸吸干多余水分，避免冻存时结冰。

　　③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

　　8、微生物样本

　　①样本量干重200mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液清洗三次，去除培养基成分，然后离心去除上清保存。

仅供科研用途，不可用于临床诊断！